پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 161 |
| تعداد شماره‌ها | 6,532 |
| تعداد مقالات | 70,501 |
| تعداد مشاهده مقاله | 124,095,303 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 97,201,545 |
ذخیره سازی طولانی سوسپانسیون سلولی چند رقم برنج(Oryza sative L.) ایرانی به عنوان ژرم پلاسم در مافوق سرما | ||
| مجله علوم کشاورزی ایران | ||
| مقاله 1، دوره 32، شماره 4 - شماره پیاپی 1086، تیر 1380 اصل مقاله (687.97 K) | ||
| نویسندگان | ||
| نادعلی بابائیان جلودار؛ مایک دیوی؛ ادوارد کوکینگ* | ||
| چکیده | ||
| نگهداری مواد ژنتیکی در مافوق سرما تکنیکی است که در بسیاری از مراکز تحقیقاتی دنیا برای نگهداری ژرم پلاسم گیاهی در مدت زمان طولانی از آن استفاده می نمایند. جهت استفاده این تکنیک در نگهداری ژرم پلاسم برنج، آزمایشی انجام شده تا دریافته شود سوسپانسیون سلولی را حداکثر چه مدت می توان با حفظ باززایی آن در مافوق سرما نگهداری نمود؟ برای این منظور ابتدا در محیط کشت LS2.5 از بذور سه رقم برنج ایرانی (آمل -3 ، خزر و طارم ) کالوس تولید شد. جهت ذخیره کردن سوسپانسیون سلولی در ازت مایع ، سلول ها را در محیط کشت های مایع AA2 و R2 به مدت 3 الی 4 روز وا کشت نموده سپس 2/0 گرم از این سلولها به داخل ظروف کوچک از جنس پولی پروپیلن انتقال داده و همزمان 75/0 سانتی متر مکعب از مخلوط مواد 342.3 g/l ، Sucrose؛ 39 g/l PH 8.5 ، DMSO؛ 46 g/l، Glyserol همراه با پرولین 5 گرم در لیتر اضافه نموده تا سوسپانسیون سلولی بتواند سرمای زیاد را تحمل نماید . بعد از این عمل ظروف حامل سلول ها را به مدت یک ساعت در داخل یخ نگهداری یخ نگهداری نموده وسپس آنها را در داخل ظروف آلومینیومی گذاشته تا به داخل ازت مایع انتقال داده شود. جهت انتقال به داخل تانک ازت مایع ابتدا به مدت 35 دقیقه در دمای منهای 35 درجه سانتی گراد نگهداری و بعد از آن در مافوق سرما (-196 درجه سانتی گراد) به مدت دوازده ماه نگهداری گردید. بعد از یک سال ظروف از ازت مایع بیرون آورده شد و بلافاصله در داخل آب گرم سترون 45 درجه سانتی گراد برای مدت یک تا دو دقیقه نگهداری شد. بعد از اینکه سلول ها از یخ زدگی به حالت اولیه برگشت مواد اضافه شده با پیپت جدا شده و سلول ها بر روی محیط کشت نیمه جامد R2 و AA2 که روی آن دو فیلتر از نوع واتمن گذاشته شده بود، کشت گردید و در دمای 1 درجه سانتی گراد +26 و -26 و در تاریکی نگهداری شد. نتیجه این مطالعه نشان داد که بعد از دوازده ماه نگهداری سلول ها در مافوق سرما مجدداً برای همه رقم ها سوسپانسیون سلولی تشکیل شد. سوسپانسیون سلولی تشکیل شده برای تولید پروتوپلاست استفاده گردید. ارقام آمل -3 و طارم در مقایسه با شاهد تقریباً دو برابر افزایش تولید پروپلاست داشته ولی رقم خزر در مقایسه با شاهد 20% افزایش داشته است. همچنین در مقایسه باززایی پروتوپلاستها با پروتوپلاست های شاهد نتایج نشان داد که ارقام آمل -3 و خزر به طور معنی داری کاهش باززایی داشته اما برای رقم طارم در مقایسه با شاهد اختلاف معنی داری مشاهده نشده است. در این آزمایش به ترتیب برای ارقام آمل -3 ، خزر و طارم تعداد 24 ، 32 و 49 گیاه سبز به دست آمده است. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| باززایی؛ برنج؛ پروپلاست؛ ذخیره سازی طولانی؛ ژرم پلاسم؛ سوسپانسیون سلولی؛ مافوق سرما | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| - | ||
| چکیده [English] | ||
| In cereals, cell suspension culture is an essential source of protoplast. However, over a period of time suspension cultures lose the ability to release protoplasts capable of plant regeneration. In this case, cryopreservation has been investigated as a means of providing stocks of cells for re-initation of embryogenic cell suspension cultures by long term storage of biological tissues at ultra - low temperatures. In this study, dehusked rice seeds were surface sterilized in 30% (v/v) Domestos bleach incubated onto LS medium supplemented with 2.5 mgrI 2, 4 - D and made semi - solid by the addition of 4grI seakem agarose. Suspension cultures were initiated from friable, globular, embryogenic callus in R2 (cv. Tarom) and AA2 (cvs. Arnol - 3 and Khazar) media, respectively. Cells were transferred to R2 and AA2 media supplemented with 60 grI mannitol 3-4 days before freezing. Cells were harvested on a 45flm nylon mesh and placed into 2 cm3 polypropylene vials, (0.2 g of cells / vial.) Approximately 0.75 cm3 of chilled (on iced water), filter sterilized, cryoprotectant mixture [glycerol, 46.0g/1; dimethyl sulphoxide (DMSO), 39.0 g/l; sucrose 342.3 g/l; proline 5.0 g/l] was added to each vial and mixed with the cells. Cells were cryoprotected for 1 h on iced water. Vials were transferred to aluminium cans and the cells frozen in a controlled rate freezer. After one year cells were thawed, by plunging the vials into sterile water (45" c; 1-2 min). The cells were then placed onto double layers of sterile 5.5 cm filter paper discs (Whatman No.1; one disc above the other, per 9 cm petri dish) overlying aliquots ofR2 and AA2 media made semi - solid with Seakem agarose (20-25 ml per dish). The Cells were maintained at (26:i: 1 0 c) in dark and subcultured by transferring cells on the uppermost filter paper discs to fresh AA2/ R2 media as before, 3 d post thaw. Callus and cell suspension cultures were initiated for 3 cultivars (Arnol-3, Tarom and Khazer). Cell suspensions were re-initiated for all cultivars in R2 and AA2 liquid media and maintained under the same conditions as unfrozen cultures. The post - thaw viability of cells was determined by the reduction of triphenyl tetrazolum chloride (TTC). Protoplasts were isolated from an unfrozen suspension and re-established cell suspensions. Protoplast yield of re- established cell suspensions were higher than that of unfrozen cells. Generally, protoplast yields increased for - re-established cell suspension cultures as compared with unfrozen control cultures. Shoot regeneration was achieved from protoplasts isolated from cryopreserved re-initiated cell suspension cultures of all 3 cultivars. In this study, 24 plants for cv. Arnol-3 , 32 plants for cv. Kahzer and 49 Plants for cv. Tarom were produced. Cryopreservation is thus a feasible means for the secure storage of potentially unique, cell suspensions of Iranian Indica and Japanica rices of agronomic importance. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| Cell suspension, Cryopreservation, Iranian Indica and Japanica | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,457 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 997 |
||