پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 161 |
| تعداد شماره‌ها | 6,532 |
| تعداد مقالات | 70,501 |
| تعداد مشاهده مقاله | 124,115,508 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 97,219,675 |
جداسازی و تهیه ساختار Antisense ژن fae و انتقال آن به گیاه کلزا (Brassica napus) | ||
| مجله علوم کشاورزی ایران | ||
| مقاله 7، 1-37، شماره 3 - شماره پیاپی 1467، فروردین 1385 اصل مقاله (759.38 K) | ||
| نویسندگان | ||
| علی‌رضا زبرجدی؛ مختار جلالی جواران؛ علی هاتف سلمانیان؛ قاسم کریم زاده؛ احمد معینی؛ امیر موسوی* | ||
| چکیده | ||
| کلزا به عنوان یکی از مهمترین گیاهان روغنی دنیا محسوب می‌شود. کیفیت روغن حاصله از دانه کلزا به ترکیب اسیدهای چرب تشکیل دهنده آن بستگی دارد. ساخته شدن زنجیره‌های طویل اسیدهای چرب اشباع و غیراشباع دارای مراحل مختلفی می‌باشد که هر یک از این مراحل توسط آنزیم یا آنزیمهای متعدد کنترل می‌شود. تغییر در محتوای اسیدهای چرب روغن کلزا با استفاده از روش مهندسی ژنتیک نیازمند شناسایی، جداسازی و دستورزی در ژنهای درگیر در بیوسنتز اسیدهای چرب می‌باشد. اسید اروسیک (C22:1) یکی از مهمترین اسیدهای چرب تأثیر گذار بر کیفیت روغن کلزا می‌باشد، بطوریکه میزان بیشتر از 2 درصد آن باعث کاهش شدید کیفیت روغن خوراکی کلزا می‌گردد. تحقیقات نشان داده است که آنزیم -ketoacyl-CoA synthase(KCS) ? آنزیم کلیدی در بیوسنتز اسید اروسیک می‌باشد. این آنزیم توسط ژن fae (Fatty Acid Elongase) تولید می‌شود که تبدیل شدن اسید چرب C18 به C20 و C22 را عهده‌دار است. در این تحقیق جداسازی، همسان سازی، تهیه ساختار ژنی آنتیسنس و انتقال ژن سنتز کننده این اسید چرب به گیاه کلزا مورد بررسی قرار گرفت و به منظور خاموش نمودن ژن فوق و جلوگیری از سنتز اسید اروسیک، سازه آنتیسنس از این ژن (fae) تهیه شد. بدین منظور DNA ژنومی گیاه کلزا به روش CTAB استخراج و با طراحی یک جفت آغازگر و استفاده از روش PCR، ژن مورد نظر جدا گردید. قطعه 1521 جفت بازی حاصل از تکثیر ژن با استفاده از هضم آنزیمی توسط آنزیمهای محدود‌گر EcoRV)و (HindIII آنالیز و مورد تأیید قرار گرفت. به منظور تأیید نهایی، ژن جداسازی شده در ناقل عمومی pSK کلون و با استفاده از آغازگرهای استاندارد تعیین توالی گردید و صحت آن مورد تأیید مجدد قرار گرفت. با توجه به هدف تحقیق که کنترل میزان تولید اسید اروسیک می‌باشد، سازه آنتی سنس ژن fae در جایگاه همسان سازی پلاسمید بیانی گیاهی pBI121 همسانه‌سازی شد. پلاسمید pBI121 نوترکیب به باکتری Agrobacterium tumefacience سویه LBA4404 وارد و از آن به منظور تولید سلولهای تراریخت و تولید گیاه تراریخت استفاده گردید. با وجود رشد گیاهان روی محیط حاوی کانامایسین از PCR با آغازگرهای اختصاصی، لکه گذاری نقطه‌ای و آنالیز سادرن برای تأیید انتقال ژن مورد مطالعه استفاده شد. خاموش شدن ژن fae توسط ساختار آنتیسنس منتقل شده باعث کاهش قابل ملاحظه میزان اسید اروسیک در گیاهان تراریخت B. napus گردید. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| آنتیسنس؛ آنزیم KCS؛ اسید اروسیک؛ ژن fae؛ کلزا؛ کلونینگ | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| - | ||
| چکیده [English] | ||
| Brassica napus is one of the most important oil crops in the world. The quality of rapeseed oil is determined by its fatty acids content. The saturated and unsaturated fatty acids biosynthesis pathway has many different stages which are controlled by various enzymes. Modification of the Brassica oil for the desired fatty acid profile through genetic manipulation necessitates identification and isolation of genes involved in the fatty acid biosynthesis. Erucic aicd (C22:1) is one of the most saturated fatty acids that affects rapeseed oil quality, when its amount increase to over 2 persen becomes undesiralae for human consumption. ? -ketoacyl-CoA synthase (KCS) was shown to be one of the key enzymes for biosynthesis of erucic acid. This enzyme, produeced by fae (fatty acid elongase), is involved in production of eicosenoic (C20: 1) and erucic acids (C22: 1) from C18 fatty acids. In this study we reported isolation, cloning and transformation of fae gene into B. napus. (For gene silencing and prevention of erucic acid synthesis antisense conctruct from fae gene was produced. Primer spicific design was done for gene isolation and its amplification. The fae gene (1521 bp) was isolated from genomic DNA by PCR technique. Digestion by restrictive enzymes (Hind III and EcoRI) was used to insure and ????? the fragment. Then, gene was cloned into pSK+ vector and sequenced with standard primers. Antisense construct from fae gene was cloned in cloning site of plant binary vector pBI121. This vector was then introduced to Agrobacterium tumefaciens to be used in plant transformation. Growth of transgenic plant on medium with kanamycin and its PCR shown that these plant were transformed. Dot blotting and Southern blot on transgenic plants were done. Silencing of fae gene by antisense construct be caused remarkable reduce in content of erucic acid in transformed plants of B. napus. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| Antisense, Brassica napus, Erucic acid, Fae gene, Gene cloning, KCS enzyme | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,745 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,379 |
||