تعداد نشریات | 161 |
تعداد شمارهها | 6,532 |
تعداد مقالات | 70,501 |
تعداد مشاهده مقاله | 124,098,672 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 97,206,325 |
استفاده از روش Nested-PCR برای تشخیص آلودگی کشتهای سلولی به ویروس pestivirus | ||
مجله تحقیقات دامپزشکی (Journal of Veterinary Research) | ||
مقاله 3، دوره 63، شماره 1 - شماره پیاپی 722559، فروردین 1387، صفحه 11-16 اصل مقاله (804.2 K) | ||
نویسندگان | ||
سید علی قرشی1؛ مرتضی دلیری جوپاری1؛ دینا مرشدی1؛ ترانه حاجیان1؛ محسن لطفی2 | ||
1گروه میکروبیولوژی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری | ||
2موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج | ||
چکیده | ||
در این مطالعه یک روش Nested-PCR برای تشخیص دو ویروس BVDV از سویه NADL بهینه سازی گردید. در آزمایش RT-PCR، قسمتی از منطقه غیر قابل ترجمه ناحیه '5 ویروس به طول 249 جفت باز تکثیر شد. محصول PCR در وکتور R/T57pTZ کلون گردید و نتیجه تعیین ردیف اسیدهای نوکلوتیدی آن اختصاصی بودن آزمایش را تایید نمود. سپس پرایمرهای داخلی انتخاب و آزمایش Nested-PCR انجام گردید و یک قطعه DNA به طول 155 جفت باز تکثیر شد. میزان حساسیت آزمایش RT-PCR، 50TCID 104 و میزان حساسیت آزمایش Nested-PCR در تشخیص ویروس BVDV در کشت سلول، 50TCID102 تعیین گردید. تعداد 7 نمونه از کشتهای سلولی با سه روش PCR, ELISAو Nested-PCR مورد آزمایش قرار گرفتند. نتایج نشان داد که حساسیت روشهای مولکولی در تشخیص ویروس در نمونهها نسبت به روش ELISA بیشتر میباشد. | ||
کلیدواژهها | ||
آلودگی کشت سلولی | ||
عنوان مقاله [English] | ||
DETECTION OF PESTIVIRUS CONTAMINATION IN CELL CULTURES BY NESTED-PCR | ||
نویسندگان [English] | ||
Seyyed Ali Ghorashi1؛ Morteza Daliri Joupari1؛ Dina Morshedi1؛ Taraneh Hajian1؛ Mohsen Lotfi2 | ||
چکیده [English] | ||
In this study a nested-PCR assay was optimized for detection of two BVDV biotype of NADL strain. A part of 5' non-coding region of virus, 249 bp in size, was amplified in RT-PCR. PCR product was cloned in a pTZ57R/T vector and sequencing results confirmed the specificity of the test. Internal primers were designed and a 155 bp DNA fragment was amplified in nested-PCR. The sensitivity of RT-PCR and nested-PCR for detection of virus in cell culture were found to be 104 TCID50 and 102 TCID50, respectively. Seven cell cultures were tested for BVDV contamination using ELISA, RT-PCR and nested-PCR. Results indicate that sensitivity of molecular tests for detection of virus in cell culture samples is higher than ELISA. | ||
کلیدواژهها [English] | ||
cell culture contamination, PCR, Pestivirus | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,309 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,268 |